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酵母菌落直接質(zhì)粒轉(zhuǎn)化法
日期：2025-04-02 12:29
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摘要：
酵母菌落直接質(zhì)粒轉(zhuǎn)化法
1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉(zhuǎn)移到1.5ml的無(wú)菌離心管中。
2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉(zhuǎn)化DNA是用未經(jīng)RNA酶處理的“mini－prepDNA”方法制得，則不需加載體DNA）。
3．加0.5mlPLATE溶液，振蕩。
PLATE溶液：
40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；SigmaP3640）
0.1mol/L醋酸鋰
10mmol/LTris-HCl（pH7.5）
1mmol/LEDTA
4．置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，室溫培養(yǎng)4天。
5．置42℃下熱激15...
酵母菌落直接質(zhì)粒轉(zhuǎn)化法
1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉(zhuǎn)移到1.5ml的無(wú)菌離心管中。
2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉(zhuǎn)化DNA是用未經(jīng)RNA酶處理的“mini－prepDNA”方法制得，則不需加載體DNA）。
3．加0.5mlPLATE溶液，振蕩。
PLATE溶液：
40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；SigmaP3640）
0.1mol/L醋酸鋰
10mmol/LTris-HCl（pH7.5）
1mmol/LEDTA
4．置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，室溫培養(yǎng)4天。
5．置42℃下熱激15分鐘。
6．以8000～10000r/min離心10秒沉淀細(xì)胞，小心棄去上清液，將細(xì)胞輕輕懸浮到200μl無(wú)菌蒸餾水，使細(xì)胞懸浮均勻，再直接將混合液涂選擇平板。
